بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت سلولی معین برای تولید ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک

Authors

  • حیدری, محمد پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
  • دارابی, احسان پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
  • زین الدینی, مهدی پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.
Abstract:

زمینه و اهداف: ایمونوتوکسین یک پروتئین سمی است که به عنوان یک ترکیب نوین برای درمان سرطان پیشنهاد شده است. اونتاک یک ایمونوتوکسین نوترکیب می باشد که از توکسین دیفتری هیبرید شده با اینترلوکین2 تشکیل شده است. در این مطالعه بهینه سازی ترکیب محیط کشت معین بمنظور بیان اونتاک بررسی شده است. مواد و روش کار: در این تحقیق از باکتری سویه BL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب PET-IDZ  جهت بیان اونتاک استفاده گردید. ترکیب محیط کشت همچون منبع کربن( گلوکز، ساکارز و گلیسرول)، منبع نیتروژن (کلرید آمونیوم، اوره و سولفات آمونیوم)، غلظت های مختلفIPTG  به عنوان القاگر (0/1  ,5/0  , 1 mM)، زمان القاء و غلظت های مختلف اسید آمینه برای افزایش بیان در کشت فلاسک لرزان بر اساس روش تاگوچی بهینه سازی شده است. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی اندازه گیری  شده و میزان بیان پروتئین توسط الکتروفورز روی ژلSDS-PAG   مورد بررسی قرار گرفته است. یافته‌ها: محیط کشت معین اصلاح شده حاوی (g/l)glucose:8 :، K2HPO4:15، KH2PO4: 7.5، Citric acid:2، NH4CL:3، MgSO4.7H2O:1gl به عنوان محیط کشت بهینه تعیین گردید. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت 0.1mM، در کدورت نوریOD600nM=2  تعیین شد. با اضافه کردن اسیدهای آمینه (g/l):Valine,0.0502 Pheyalanine,0.0132 Lysine,0.0184 Aspartic acid,0.0160 Serine,0.0251، به محیط کشت، بیان پروتئین اونتاک افزایش یافته است. نتیجه‌گیری: در پژوهش حاضر، آنالیز نتایج به روش تاگوچی مشخص کرد که نوع منبع نیتروژن (کلریدآمونیوم 3 g/l) تاثیر قابل توجهی در رشد سلول داشته است. تولید توده زیستی در محیط کشت بهینه سازی شده نسبت به محیط کشت M9، تقریبا 3  برابر بوده است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بررسی ترکیب محیط کشت پیچیده برای بهبود تولید ایمونوتوکسین اونتاک بوسیله سویه اشریشیاکلی نوترکیب

Background and Objective: In recent years, the biological methods have been considered as a most promising candidate for the cancer treatment. One of the most applicable methods is recombinant proteins. ONTAK immunotoxin is a special drug for cancer therapy of leukemia, lymphoma and melanoma. With respect to the dramatic growth of cancer in today's society, production of recombinant prot...

full text

بررسی ترکیب محیط کشت پیچیده برای بهبود تولید ایمونوتوکسین اونتاک بوسیله سویه اشریشیاکلی نوترکیب

چکیده  زمینه و هدف: در سال های اخیر به منظور درمان بسیاری از بیماری ها از جمله سرطان به روش های زیستی روی آوردند که یکی از پر کاربردترین این روش ها استفاده از پروتئین های نوترکیب می باشد. ایمونوتوکسین اونتاک یک داروی ویژه برای درمان سرطان جهت بیماران مبتلا به لوکمیا، لنفوما و ملانوما است. با توجه به رشد چشمگیر سرطان در جامعه امروزی، بومی سازی ساخت داروهای نوترکیب امری ضروری به نظر می رسد. در ای...

full text

بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین

در بررسی حاضر، بخش CDاز پروتئین باکتریورودوپسین (BR) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت BRبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pET21a+ در محل ‌های برش Nde I وHind III کلون شده و تحت کنترل پیش‌بر T7</em...

full text

بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه c-d نوترکیب باکتریورودوپسین

در بررسی حاضر، بخش cdاز پروتئین باکتریورودوپسین (br) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت brبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pet21a+ در محل ­های برش nde i وhind iii کلون شده و تحت کنترل پیش­بر t7 با موفقیت بیان شد. پروتئین بیان شده با sds page تجزیه شد. اثر دما (a)، زمان القا (b)و زمان فرایند پس از القا (c) روی بازده ی میزان بیان پروتئی...

full text

بهینه سازی ترکیب محیط صنعتی کشت زانتاموناس کمپستریس (campestris Xanthomonas) به منظور افزایش بازده تولید زانتان به شیوه سطح پاسخ

مقدمه: صمغ زانتان به دلیل رفتار سودوپلاستیک، نسبت به صمغ‌های نیوتنی احساس صمغی کم‌تری در دهان ایجاد کرده و به عنوان قوام‌دهنده و تعلیق‌کننده کاربرد زیادی در صنعت غذا دارد. زانتان صمغی باکتریایی است و فرایند تولید آن به‌شدت تحت تأثیر ترکیب محیط کشت قرار دارد. هدف از این مطالعه بهینه‌سازی محیط کشت صنعتی برای رسیدن به حداکثر بازده صمغ زانتان است. مواد و روش­ها: تولید صمع زانتان توسط باکتری زانتام...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 8  issue 3

pages  51- 57

publication date 2014-10

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023